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本试剂盒的独特组分可以提取细胞及组织中膜蛋白。特殊的提取Buffer在裂解细胞的同时，还可以选择性地分离提取出细胞膜蛋白和胞器膜蛋白，提取方法简单、可靠、快速，获得的膜蛋白纯度高。每次可以提取1×10⁷个培养细胞或200mg动物组织，本试剂盒可以使用50次。

• 整个操作过程只需要60min左右；
  
• 既可以用于培养细胞(50×10⁷个)，又可以用于动物组织(50×200mg)蛋白质的提取；
  
• 避免蛋白酶对蛋白质的降解，保持膜蛋白质的完整性和天然活性；
  
• 提取的膜蛋白纯度高，不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。

• 所有的试剂及器具均需预冷后使用，以保证蛋白质的完整性，细胞或组织量需达到要求。
  
• 抽提Buffer 4℃时为混悬状态，请于此温度下混匀后吸取加入样本中。
  
• 室温25℃～37℃时，抽提Buffer需静置30min以上可看到分为上下两层，其中约9/10至4/5为上层水相，下层只占1/10至1/5为有机相。
  
• 因膜蛋白分子量较大，可适当提高离心速度至16000rpm，延长离心时间最长不超过20min，可有效提高沉降效率。
  
• 加入Urea、Thiourea、NDSB-201、SB3-10等强溶解能力试剂或Loading Buffer有助于膜蛋白的完全溶解。
  
• 如果需要，请在实验前，在提取Buffer中加入1倍浓度的我司生产的磷酸酶抑制试剂，(GS1415或GS1416或GS1417)，再进行动物组织或细胞膜蛋白质的提取。
  
• 提取的膜蛋白质中含有高浓度的表面活性剂但不影响蛋白活性，可以采用我公司生产的非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒(GS1485)或改良型Lowry法蛋白质浓度定量试剂盒(GS1487)或改良型BCA法蛋白质浓度定量试剂盒(GS1483)对提取样品中的蛋白质进行定量。
  
• 提取的膜蛋白质，如果用于2D电泳，可以将操作步骤10所得的膜蛋白沉淀，使用我公司生产的膜蛋白质溶解液(GS1422)或2D样品提取液(GS1433~GS1438)进行溶解，再用于2D电泳。
  
• 如果用于蛋白质质谱研究，请用请用我司生产的铜染(GS1532)或锌染(GS1534)或质谱用快速银染试剂盒(GS1419)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。对于一般的染色，可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液(GS1479)或高灵敏考马氏亮蓝染色液(GS1549)或通用型蛋白染色液(GS2027)进行染色。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 使用后请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 对于悬浮培养或用细胞刮刮下的贴壁培养细胞，离心收集不少于1×10⁷细胞，再用预冷的双蒸水稀释至一倍浓度的洗涤液洗涤细胞三次，每次3000rpm离心5min。
  
• 对于组织样本(200mg)尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，冰上剪碎，再用预冷双蒸水稀释至一倍浓度的洗涤液洗涤细胞三次。
  
• 在上述细胞或组织样本中加入1mL提取Buffer(使用前，每mL提取Buffer中加入1μL蛋白酶抑制剂和1μL DTT)，将组织在4℃环境下置于预冷的玻璃匀浆器中，手动匀浆30～50次，匀质匀浆至没有明显的组织小块。或将细胞超声破碎，每次30sec，3～4次，每次间隔1min，置于冰上冷却，超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％。
  
  • 因提取Buffer在室温时会分层，请务必在冰上放置30min后混匀，立即加入。
    
  • 因不同品牌超声破碎机功率不尽相同，请选用最适功率进行超声。
• 装入1.5mL的预冷的离心管中，冰上放置10min左右，期间取出剧烈振荡2～3次，于4℃，14000rpm离心10min，弃沉淀，上清转至新管中。
  
• 上清置于37℃水浴10min。再室温，14000rpm离心5～20min，样品分成上层和下层(含膜蛋白)。
  
  • 建议使用进口透明性较好的微量离心管，可见下层为含膜蛋白的有机相。上下两层因均为透明，只在交界处有一折光线，需仔细观察才可见到。或室温静置30min～60min亦可见分层分上下两层，水平转头在高速旋转的时候容易使有机相和水相保持分层状态，以下亦同。
• 取下层，加入500μL冰冷灭菌水，4℃放置5min，再置于37℃水浴10min。
  
• 室温，14000rpm离心5～10min，样品分成上层和下层(含膜蛋白)。
  
• 取下层，加入500μL冰冷灭菌水，4℃放置5min，再置于37℃水浴10min。
  
• 室温，14000rpm离心5～10min，样品分成上层和下层(含膜蛋白)。
  
• 最终得到的下层即为膜蛋白提取物，冷冻保存。

• 每100μL膜蛋白提取混合物加入0.9mL丙酮，冰浴20min，12000rpm离心20min。
  
• 弃上清，沉淀真空旋干或置冰上干燥约10min到30min(敞开离心管盖)。
  
• 该步可选：可以加入Urea、Thiourea、NDSB-201，SB3-10等强溶解能力试剂溶解膜蛋白，分装，冷冻保存。
  
• 加入适当体积的1X Loading Buffer溶解，彻底分散(枪头反复吹吸或剧烈涡旋)，煮沸5min，离心取上清。